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随机引物

适用于长的或具有发卡结构的 RNA ；适用于 rRNA 、 mRNA 、 tRNA 等所有 RNA 的反转录反应；主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。

Oligo dT

适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA 。（原核生物的 RNA 、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具有 PolyA 尾巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。

特异性引物

与模板序列互补的引物，适用于目的序列已知的情况。

抑制

不抑制

RNase A

RNase T1

RNase B

S1 核酸酶

RNase C

从曲霉属中提出的 Rnase

活性

通过与酶分子非共价结合抑制 RNase 活性

抑制类型

竞争性抑制

结合常数

Ki=4.4×1014

与 RNaseA 结合比例

1:1

分子量

51,000 道尔顿

等电点

pH4.7

自由巯基

30

pH 的适应范围

pH5-8( 在 pH7-8 具有最高活性 )

金牌酶（热启动酶）

金牌酶用途

主要用于 PCR 扩增和一步法 RT － PCR ；特别适合临床 PCR 诊断试剂，这样可以降低运输条件和降低对临床操作人员的要求。

金牌酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，经过化学修饰，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。

•  在常温下没有聚合酶的活性，需经过 95 ℃ 4mins 的高温造成化学修饰基团的脱落，然后才有聚合的活性；这样就避免在低温阶段的非特异性扩增；大大提高了 PCR 反应的灵敏度和特异性。随着 PCR 扩增的进行，酶活性会被逐步释放，这样就有效提高扩增效率及产物量。

•  具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；无 3 '到 5 ‘外切酶的活性。

•  具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 可用于实时荧光 PCR 。

•  具有 3 ‘端加 A 的功能，产物经纯化后可直接用于 T － A 克隆。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

•  最佳延伸温度 72 ℃ ，最佳 Mg 2+ 浓度 1.5mM ，最佳 dNTPS 浓度 0.2mM , 延伸速度为 2000base/min 。

金牌酶单位定义

在 74℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH8.3 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 终反应体积为 50ml 。

金牌酶(热启动酶)　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

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Tth DNA 聚合酶

用途

主要用于 PCR 扩增和一步法 RT － PCR ；它同时具有 DNA 聚合酶的活性和反转酶的活性；可用于实时 PCR 。

特征

•  Tth DNA 聚合酶是一种热稳定性酶，分子量为 92kDa ，从 Thermus thermophilus HB-8 中分离。

•  在 74℃ 时可进行 DNA 复制，在 95℃ 的半衰期为 20 分钟。

•  Tth DNA 聚合酶在镁离子存在的条件下可催化核苷酸沿 5'—3' 方向发生聚合反应，形成双链 DNA ，也可在镁离子存在的条件下，以 RNA 为模板沿 5'—3' 方向发生核苷酸聚合反应。

•  该酶也具有 5' － 3' 外切酶活力，无 3' － 5' 外切酶活力， 可用于实时荧光 PCR 。

•  能在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性；减少了由于 RNA 二级结构引起的问题。

•  10× 逆转录反应缓冲液： 100mM Tris-HCl (pH 8.3 ， 25℃ ), 900mM KCl ； 10×PCR 反应缓冲液： 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ) 和 1 ％ Triton X-100 。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

单位定义

在 70℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为 TCA 不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 200mM dNTP ( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 活化的小牛胸腺 DNA 作为底物。

UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)

UNG酶用途

因PCR是一种极敏感的扩增技术，易受污染的影响。小量的外源 DNA 污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时，会发生共同来源的污染，这称之为残余污染；从其他样品中纯化的 DNA 或克隆的 DNA 也会是污染源。卫生部已经明确规定，凡是用于临床检验的PCR试剂，都应该有 UNG酶技术，以防止污染。

控制污染的方法主要有两种：

1 、在 PCR 实验过程中使用良好的实验步骤和实验环境减少残余污染：使用抗气雾剂移液管的阻止气雾剂进入 eppendorf 管内；为 PCR 样品配制和扩增后分析设计隔离的区域；在准备新反应前更换手套；总是使用不含有模板的阴性对照检测污染；使用预先混合的反应成分，而不是每个反应的每个试剂单独加入。

•  使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶 -N- 糖基化酶或UNG酶）移除 DNA 中的尿嘧啶，在PCR反应液配制时，将dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得扩增产物含有脱氧尿嘧啶，这种产物对 UNG 敏感，所有可以在PCR前对新配制的反应用 UNG 处理以破坏残余产物，杜绝污染。

UNG酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。

•  50ul 体系中，加入0.1U的UNG酶，能够消除 10 7 带有 dUTP 的、大于 6 个碱基的双链DNA 污染。

•  反应条件： 37℃ ，2分钟；反应 buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT;60度以上可以灭活。

UNG酶　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

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反转录酶

常见的反转录酶主要有： M-MLV 、 AMV 、 Tth 。通常 MLV 用于普通的 RT 反应， AMV 用于基因比较复杂、有二级结构或 GC 含量较高的 RT 反应， T th 用于单酶体系、基因结构较复杂的 RT 反应；如果 cDNA 要用于克隆表达， 建议使用 MLV 或 AMV ；如果用于基因表达水平的检测或杂交探针的制备，建议使用 Tth 。

RT 反应，引物的选择

影响 RT 反应的因素

影响 RT 反应的因素比较多，主要是 RNA 的质量，要求没有 RNA 酶的污染、没有基因组的污染；另外还有引物的选择是否合适；酶的浓度是否合适等。

FicoScript®M-M ranscriptase(反转录酶)

FicoScript®Reverse Transcriptase（反转录酶） is an engineered version of M-M T with reduced RNase H activity and increased thermal stability. The enzyme is purified to near homogeneity from E. coli containing the modified pol gene of Moloney Murine Leukemia Virus . The enzyme can be used to synthesize first-strand cDNA at temperatures up to 48°C, providing increased specificity, higher yields of cDNA, and more fulllength product than other reverse transcriptases. It can generate cDNA from 100 bp to >12 kb.It is suitable for qPCR. 
1 、 Enzyme Storage Buffer: M-M everse Transcriptase is supplied in 20mM Tris-HCl (pH 7.5), 200mM NaCl, 0.1mM

EDTA, 1mM DTT, 0.01% Nonidet P-40 and 50% glycerol.

2 、 M-M everse Transcriptase 5X Reaction Buffer: When the M-M everse Transcriptase 5X Reaction Buffer supplied with this enzyme is diluted 1:5, it has a composition of 50mM Tris-HCl (pH 8.3 25°C ), 75mM KCl, 3mM MgCl 2 and 10mM DTT.

3 、 Source: Purified from an E. coli strain expressing a recombinant clone.

4 、 Storage Conditions: Store at – 20°C . Avoid exposure to frequent temperature changes.

5 、 Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C . The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 8.3), 7mM MgCl 2 ,

40mM KCl, 10mM DTT, 0.1mg/ml BSA, 0.5mM [ 3 H]dTTP, 0.025mM oligo(dT) 50 , 0.25mM poly(A) 400 and 0.01% NP-40.

6 、 Usage Note: M-M everse Transcriptase is less processive than AMV Reverse Transcriptase, and therefore, more units of the M-M nzyme are required to generate the same amount of cDNA as in the AMV reaction. Thus, starting with 1μg of mRNA

in a first-strand cDNA synthesis, 200 units of the M-M nzyme are recommended as opposed to 25 units of the AMV enzyme.

反转录酶　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

AMV Transcriptase(反转录酶)

1 、 AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer: The AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer supplied with this enzyme has a composition of 250mM Tris-HCl (pH 8.3 25°C ), 250mM KCl, 50mM MgCl 2 , 2.5mM spermidine and 50mM DTT.

2 、 Enzyme Storage Buffer: AMV Reverse Transcriptase (AMV-RT) is supplied in 200mM potassium phosphate (pH 7.2 4°C ), 0.2% Triton ? X-100, 2mM DTT and 50% glycerol.

3 、 Source: Purified from avian myeloblastosis virus particles.

4 、 Storage Conditions: Store at – 20°C . Avoid multiple freeze-thaw cycles and exposure to frequent temperature changes.

5 、 Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C . The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 8.3), 40mM KCl,

8.75mM MgCl 2 , 10mM DTT, 0.1mg/ml acetylated BSA, 1mM radiolabeled dTTP and 0.25mM poly(A):oligo(dT).

6 、 Usage Notes: The AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer is intended for use in standard first-strand cDNA synthesis reactions. No deoxynucleotides are in the buffer; The formulation of AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer is not compatible with M-M everse Transcriptase. Up to 10μl of an RT reaction containing AMV-RT and the supplied AMV Reverse Transcriptase Reaction Buffer can be added

to PCR amplification reactions that use TaqDNA Polymerase.

Rnasin(核糖核酸酶抑制剂或RNA酶抑制剂)

RNA酶抑制剂概述
RNasin 是从人胎盘中提取的特异性RNA酶抑制剂，分子量为 51,000 道尔顿的蛋白质，等电点 pH 值为 4.7 。它能特异地与 RNase 以 300 的抑制常数 (ki) 以非共价键结合形成复合体而使 RNase 失去活性。在缓冲液为 0 -0.5M NaCl ， pH5-8 的条件下保持其活性， pH7.8 时活性最高。经严格质量检验，该产品为电泳纯，无 RNase 、 Nickase 污染，比活为 100,000 单位 / 毫克蛋白，达到国际标准。

RNA酶抑制剂特性
1. 抑制一般的真核 RNase 包括 RNaseA 、 B 、 C 和人胎盘 RNase ；
2. 不抑制 RNase H ， S1 核酸酶， SP6 ， T7 和 T3 RNA 聚合酶， AMV 或 M-MLV 反转录
酶， Taq DNA 聚合酶， RNase T1 ；
3. 活性 pH 范围宽广，但需要 1mM DTT 以保持其活性。

RNA酶抑制剂应用
1. 用在有潜在 RNase 污染的地方。
2. 在 cDNA 合成中保护 mRNA 。
3. 体外转录系统、翻译系统，保护 mRNA 。
4. 用于多核糖体的活性、产量增加。

5. 增进体外病毒复制。
6. 促进同源体系中的 RNA 翻译。
7. 制备无 RNase 的抗体。
8. 提高 Riboprobe (R) 系统 RNA 合成反应的得率。
浓度 20-40u/ul 。
RNA酶抑制剂单位定义
抑制 5ng RNase A 活性的 50 ％所需酶量为一单位。

储藏缓冲液

20mM HEPES-KOH pH7.6, 50mM KCl, 8mM DTT, 50% 甘油。

RNA酶抑制剂对核酸酶的选择性抑制

RNA酶抑制剂的性质    

RNA酶抑制剂　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

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