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使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人细胞间粘附分子1(ICAM-1)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

 

用    途： 用于人血清、血浆及相关液体样本中细胞间粘附分子1(ICAM-1)的测定。

工作原理

本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人细胞间粘附分子1(ICAM-1)的水平。向预先包被了人细胞间粘附分子1(ICAM-1)单克隆抗体的酶标孔中加入细胞间粘附分子1(ICAM-1)，温育；洗涤后，加入HRP标记过的细胞间粘附分子1(ICAM-1)抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人细胞间粘附分子1(ICAM-1)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

1	标准品（96ng/L）	0.5ml	7	显色剂A液	3ml
2	标准品稀释液	3ml	8	显色剂B液	3ml
3	酶标包被板	12孔×4条	9	终止液	3ml
4	酶标试剂	3ml	10	说明书	1份
5	20倍浓缩洗涤液	20ml	11	封板膜	2张
6	样品稀释液	3ml	12	密封袋	1个

需要而未提供的试剂和器材

1．   37℃恒温箱。

2．   标准规格酶标仪。

3．   精密移液器及一次性吸头

4．   蒸馏水，

5．   一次性试管

6．   吸水纸

注意事项

1．   从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．   各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

3．   建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

4．   严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

5．   为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6．   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7．   底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作程序

1．   标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：

48ng/L	（5号标准品）	120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液
24ng/L	（4号标准品）	120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液
12ng/L	（3号标准品）	120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液
6ng/L	（2号标准品）	120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液
3ng/L	（1号标准品）	120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液

2．   分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。  

3．   弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

4．   每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。  

5．   弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

6．   每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

7．   取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8．   测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

9．   根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。