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概述

腹泻性贝类毒素检测试剂盒的原理是酶联免疫吸附测定法，用于水及水产品中腹泻性贝类毒素的定量测定。冈田酸是腹泻性贝类毒素的一种。对于水产品需要做前处理，不可以直接检测。如果需要的话阳性样品可以通过HPLC和GC/MS来验证。

保存和稳定性

试剂盒应保存在2-8℃，不要冷冻。在使用之前要把试剂盒中的溶液回复到室温（20-25℃）。有效期内试剂盒中的试剂都可以使用。

原理

试剂盒的原理是直接竞争ELISA法，通过特异性抗体来识别冈田酸。当样品中含有冈田酸时，样品中的冈田酸与冈田酸酶结合物竞争结合溶液中的冈田酸抗体。冈田酸抗体与包被在微孔板上的羊抗鼠二抗结合。经过一步洗涤加入底物溶液，产生有色反应。产生的绿色的颜色深度与样品中冈田酸的含量成反比。加入反应停止液后使颜色由蓝色转变为黄色。用酶标仪在450nm处测定吸光度值。通过绘制标准曲线来计算样品中冈田酸的含量。

7．试剂盒特性

敏感性：1.7ng/ml

重复性：标准的变异系数小于10%，样品的变异系数小于15%

特异性：

腹泻性贝类毒素检测试剂盒能检测Okadaic acid及其它DSP，它们的结合程度是不同，以下表格中展示的是相关值及交叉反映率（%CR），以下所有浓度均为ppb级。
种 类
% CR
种 类
% CR

Okadaic Acid (DTX)
100%
Dinophysistoxins DTX-2
50%

Dinophysistoxins DTX-1
50%








样品：水样和贝类产品

A．试剂盒组成：

1、包被二抗的微孔板（羊抗兔）

2、标准（7种）0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、ng/ml

3、冈田酸抗体溶液（兔抗冈田酸）6ml

4、冈田酸酶标记物6ml

5、样品稀释液（10倍浓缩）25ml，用于稀释样品

6、5x浓缩洗液100ml

7、显色液（底物）TMB,16ml

8、终止液12ml

B.操作步骤

1、在对应的微孔中加入100μL的标准和样品（推荐做2-3个重复）

2、每个测试孔都加入50 μL冈田酸酶标记物溶液。

3、每个测试孔都加入50 μL冈田酸抗体溶液，用封口膜把微孔板盖上，轻轻的震荡微孔板30秒使里面的液体混匀。不要使液体洒出。

4、在室温下孵育60分钟。

5、孵育完成后，把封口膜取掉，将微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1X的洗液。拍板，去掉残留的洗液。

6、每个测试孔加入150μL的显色液（底物）。室温孵育20-30分钟，此步骤避免太阳光照射。

7、每个测试孔加入100μL终止液。

8、用酶标仪在450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）（在加入终止液15分钟内完成）。

C结果分析

结果分析可以利用商业ELISA分析软件(4-parameters,Logit/Log)。手工计算可以先计算标准的吸光度值的平均值，然后计算每个标准的%B/B0（用其它标准的吸光度值除以零标准的吸光度值乘以100%）。以每个标准的%B/B0做Y轴，以每个标准的冈田酸的浓度做X轴构建标准曲线。通过利用标准曲线，把样品的%B/B0代入标准可以计算出样品中冈田酸的浓度。样品中冈田酸的含量小于0.1 ppb认为阴性。当样品中冈田酸的含量大于5.0 ppb要稀释后再测定。

D结果分析

可以利用商业ELISA软件程序比如Logit/Log or 4-Parameter来评价ELISA结果。也可以通过计算每个标准的%B/B0值，以%B/B0为y轴、呋喃唑酮为x轴作一标准曲线。样品浓度可以通过标准曲线来计算。当样品中的呋喃唑酮浓度低于标准1（0.0125 ng/mL）时，认为样品中呋喃唑酮的浓度小于0.05 ppb。样品表现的浓度高于标准6(0.5 ng/mL)时要经过稀释后再测定。