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乙炔雌二醇（EE2)ELISA检测试剂盒说明书

（请以英文为准，中文仅供参考）

一、有限的保证

Japan EnviroChemicals, Ltd. (the Company, hereunder)保证此产品是按相关规定生产的在材料上没有任何问题。这个保证书规定：对于问题产品原价赔偿或用新的产品替换问题产品。用户要在收到产品30天内向公司提出书面报告，过期不候。另外，这份保证书仅适用于正常使用产品，如果是由于用户的粗细大意，失误或不合理的使用造成的问题，本公司概不负责。

产品的设计在不断的改进，我们将会对说明书做出相应的修改，对此我们将不会提前通知。

二、试剂盒特征

 E E2单克隆抗体特异地与EE2结合，和其它结构相类似的化学物质不发生交叉反应。单克隆抗体质量稳定每批次间几乎没有变化。

 定量检测范围0.05ug/L – 3ug/L (ppb)，可以满足生物样品的检测需求如水样和血液 。

 操作简单，整个过程仅花费2.5小时。

 这个试剂盒有很高的重复性，变异系数在10%之内。

 需要很少的样品就可以检测。

 试剂盒的形式是96孔微孔板，可以同时检测多个样品，花费合理。

三、检测原理 （竞争ELISA）

1. 竞争性反应 

这个检测方法依靠EE2单克隆抗体来识别EE2。样品中的EE2和一个EE2-酶结合物预先混合然后加入到每个微孔中竞争与包被在微孔表面的特异性抗体。样品中EE2的浓度如果高于EE2 -酶结合物，EE2将主要与抗体结合。反之样品中EE2的浓度如果低于于EE2 -酶结合物，EE2 -酶结合物将主要与抗体结合。

2. 显色反应 

通过洗涤步骤去除没有反应的EE2和过量的EE2-酶结合物。和微孔板中抗体结合的EE2 -酶结合物催化底物发生反应产生有色物质。通过一个孵育期用稀酸终止反应。样品中EE2的浓度越高导致结合到微孔板抗体上的EE2-酶结合物越少，从而产生的颜色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析 

利用已知的EE2标准的浓度和在450nm条件下获得的吸光度值做出一条剂量反应曲线（标准曲线）。把样品的吸光度值用内插法插入到标准曲线中可以精确的计算出样品中EE2的浓度。注意：

四、ES测定流程图

1、样品前处理

在检测前半小时把试剂盒从冰箱中拿出来使其恢复到室温（18-25°C）。过滤样品，加入甲醇使其含甲醇的终浓度为10% (v/v)。对于一些样品需要固相提取。

2、标准溶液

用10%的甲醇溶液稀释EE2标准浓缩液(#2)（10乘），制备成浓度为10ug/L EE2 稀释的储存液。然后进一步稀释成浓度范围为：0.05ug/L to 3ug/L 

3、抗原-酶结合物溶液

配制一瓶抗原-酶结合物溶液：抗原-酶结合物粉末(#3) + 7ml 缓冲液(#4, white cap)。

4、标准/样品 与结合物混合

在没有包被的微孔板(#9)中混合100uL EE2标准溶液(或样品)和100ul酶结合物溶液。

5、竞争反应

在包被抗体的微孔板(#1)的每个孔中加入100μL在上面步骤中混合的溶液，在室温(18-25°C)孵育60分钟。

6、洗液

用蒸馏水以1：5的比例稀释洗液（6倍浓缩）

7、没有结合的物质（洗涤）

每个微孔加入约300μL、1×洗液，然后弃掉洗液到合适的容器中，重复洗3次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。

8. 显色试剂

以1：10的比例混合色原体(#6)和底物溶液(#7)配制一个显色液。

9. 显色

每个微孔加入100μL显色试剂，在室温(18-25°C)孵育30分钟。然后加入每孔再100μL的终止液(#8, 黑盖)终止反应。

10. 定量

在450nm测定每个标准的吸光度值制作标准曲线。利用内插法把样品的吸光度值代入标准曲线计算样品中EE2的含量。

五、所需材料

1、试剂盒组成

编号	Contents	体积	数量	储存
1	MoAb-Coated Microplate  单抗包被微孔板	96 Wells	1 Plate	2-8°C
2	EE2 标准 (溶于10%MeOH)，浓度为100 ug/L	4mL	1 Vial	2-8°C
3	Antigen-enzyme Conjugate 抗原-酶结合物	7mL	2Vials	2-8°C
4	Buffer Solution – white cap – 缓冲液-白盖	8mL	2 Vials	2-8°C
5	Wash Solution (6-fold concentration) 洗液（6x浓缩）	50ml	1 Vial	2-8°C
6	Chromogen  Solution色原体溶液	250uL	1 Vial	2-8°C
7	Substrate  Solution 底物溶液 红盖	15mL	1 Vial	2-8°C
8	Stop Solution – black cap – 终止液-黑盖	15mL	1 Vial	2-8°C
9	Uncoated Microplate 没有包被抗体微孔板	96 Wells	1 Plate	---
10	封板膜	---	1	---
11	Instruction Booklet 说明书	---	1	---